凯氏定氮法测定蛋白质的含量,是Zui常用的蛋白质测定方法,但样品的消解费事费时,一般一台电炉一天Zui多消化两个样品。我们采用型恒温消解仪进行蛋白质消解,4~6小时可同时消化16个样品。
1 实验方法1.1 仪器及试剂1.1.1 仪器 dtd-40型恒温消解仪,平底硬质玻璃消化管;定氮蒸馏装置。1.1.2 试剂 硫酸铜;硫酸钾;硫酸;过氧化氢;20g/l硼砂溶液;混合指示剂:2份1g/l甲基红乙醇溶液与5份2g/l溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合;400g/lnaoh溶液;c(hcl)=0.02000mol/l的盐酸标准滴定溶液。1.2 实验操作1.2.1 样品消解 称0.2-2.0g固体样品或5-10g液体样品于平底玻璃消化管中,加0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于管口放一小漏斗,置于恒温消解仪中,300℃左右,小心加热,一般2h内,管内容物可全部炭化,泡沫完全停止。将温度降至240℃左右,分几次向管内共加10ml过氧化氢,提高温度至390℃左右,继续消化,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热30min,放冷后,定容100ml,混匀备用。取与处理样品相同的硫酸铜、硫酸钾、硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。 本方法全部消化过程约需4-6h,一次Zui多可消化16个样品。同时使用普通电炉进行蛋白质消解,进行比较实验。1.2.2 定氮测定 按国家标准[1]中gb5009.5-85食品中蛋白质的测定方法(4.3)微量定氮法进行操作。2结果及讨论2.1样品的用量:根据不同的蛋白质含量,取0.2g-2.0g样品,置消化管内进行消解,在300℃初始消解无外溢现象。样品先加酸放置过夜,可加快消解速度。开始消解时,由于消解温度恒定,消解管整体受热均匀,一般泡沫不能溢出管外,较直接电炉消解容易控制。2.2消解温度:初始消解时温度不可过低,过低造成消化时间延长。实验证明初始消解温度300℃为宜。只要消解管内无泡沫产生,应及时把温度提高到390℃左右,以加快消解速度。2.3不同消解方法蛋白质测定结果的比较:对保健品、乳及乳制品等15份样品,用凯氏烧瓶和恒温消解仪消化样品,分别测定蛋白质含量,结果比较如下:表1 两种消解方法蛋白质测定结果比较(%)样品号 | 普通电炉消解法 | 恒温消解仪法 |
1 | 16.3 | 17.0 |
2 | 30.8 | 33.8 |
3 | 23.0 | 22.2 |
4 | 3.25 | 3.33 |
5 | 3.38 | 3.59 |
6 | 1.44 | 1.27 |
7 | 0.510 | 0.555 |
8 | 0.490 | 0.477 |
9 | 0.842 | 0.891 |
10 | 2.95 | 3.01 |
11 | 0.576 | 0.627 |
12 | 0.574 | 0.579 |
13 | 0.572 | 0.630 |
14 | 0.319 | 0.327 |
15 | 0.319 | 0.337 |
本产品的加工定制是是,品牌是金祥龙,型号是DTD-40,测量对象是液体,固液混合物,测量精度是0.5,工作温度是室温——400(℃),重量是22(kg),适用范围是生化实验室,科研机构,类型是生物教学仪器